【摘要】  目的 优选三七的最佳渗漉提取工艺。方法 采用正交试验法,以三七总皂苷和三七总氨基酸为考察指标,对影响三七渗漉提取工艺的因素进行研究。结果 乙醇浓度、乙醇用量、渗漉速度均对三七提取工艺有显著影响。结论 三七的最佳渗漉提取工艺为用12倍量50%乙醇,渗漉速度为1～3 mL/(min·kg)。

【关键词】  正交试验；三七；提取工艺；三七总皂苷；三七素·

　　Abstract：Objective To optimize the conditions for the percolation extraction process of Panax notoginseng (Burk.) F.H.Chen. Methods Conditions for the percolation were studied by orthogonal experimental design as guided by the contents of total notoginseng saponin and total amino acids. Results The percolate rate, concentration and quantity of alcohol had significant effects on the process. Conclusion The optimum condition for the extraction of Panax notoginseng was adding 12 times amount of 50% alcohol and percolating at a rate of 1～3 mL/(min·kg).

　　Key words：orthogonal experiment；Panax Notoginseng (Burk.) F.H.Chen；extraction process；notoginseng saponin；dencichine

　　三七Panax notoginseng(Burk.)F.H.Chen为五加科人参属植物,药用主要取其根,具有散瘀止血、消肿定痛的功效。有关三七的提取研究方法报道较多,但多以三七皂苷为考察指标,而对其止血活性成分三七素未涉及。本试验以三七总皂苷及含三七素的总氨基酸为考察指标,对三七渗漉提取工艺进行研究,为三七有效成分的提取及最佳工艺条件的优选提供依据。

　　1  仪器与试药

　　TU-1901紫外分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)。三七皂苷Rg1对照品由中国药品生物制品检定所提供(供含量测定用,批号703-200201)；三七购自湖南三湘饮片实业有限公司。所用试剂均为分析纯。

　　2  方法与结果

　　2.1  三七总皂苷测定方法

　　2.1.1  标准曲线的制备  精密称取人参皂苷Rg1对照品适量,加甲醇制成每1 mL含1 mg的对照品溶液。精密量取对照品溶液10、20、40、60、80、100 μL,分别置10 mL具塞试管中,置水浴中挥干甲醇,加入新制的5%香草醛冰醋酸溶液0.2 mL、高氯酸0.8 mL,于60 ℃水浴中保温15 min,立即置冰水中冷却5 min,加冰醋酸5 mL,摇匀,放置10 min,以相应试剂为空白,照分光光度法于560 nm波长处立即测定吸收度。以浓度为横坐标,吸收度为纵坐标,绘制标准曲线。

　　2.1.2  样品测定  精密吸取各三七提取液5 mL,加水10 mL,置水浴上蒸去乙醇,移置分液漏斗中,用水饱和的正丁醇提取4次,每次10 mL。合并正丁醇提取液,置水浴上蒸干,残渣加甲醇适量使溶解,移置10 mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,精密量取10 μL,照上述“置10 mL具塞试管中”起,依法测定吸收度,计算总皂苷含量。

　　2.2  三七总氨基酸测定方法

　　精密量取各三七提取液10 mL,加水20 mL,加2滴酚酞指示剂,用0.5 mol/L氢氧化钠滴定液滴定至微红色,精密加入10 mL中性甲醛溶液,放置片刻,用0.05 mol/L氢氧化钠滴定液滴定至微红色,并用空白试验校正,每1 mL氢氧化钠滴定液相当于6.558 mg氨基酸(以亮氨酸计)。

　　2.3  三七渗漉提取条件的优化

　　2.3.1  试验设计  以乙醇浓度、乙醇用量、渗漉速度为考察因素,每个因素各取3个水平(见表1) 表1试验因素水平表,在平行操作条件下,按L9(34)表做正交试验,以三七总皂苷、三七总氨基酸含量为评价指标,筛选乙醇提取的最佳工艺条件。

　　2.3.2  试验方法  每份取三七20 g,粉碎成粗颗粒,用相应浓度的乙醇浸泡过夜,按L9(34)正交表安排试验,收集渗漉液,浓缩至100 mL。按“2.1”和“2.2”项下方法分别测定三七总皂苷和三七总氨基酸含量,结果见表2表2正交试验方案与结果,方差分析结果见表3、表4。表3三七总皂苷含量方差分析表 注：F0.05(2,2)＝19,F0.01(2,2)＝99 表4三七总氨基酸含量方差分析表 注：F0.05(2,2)＝19,F0.01(2,2)＝99由表3、表4结果分析可知,以三七总皂苷含量为评价指标,各因素对提取效果的影响程度依次为A＞B＞C,A、B、C三因素对提取工艺均有显著影响(P＜0.05)。从K值可以看出,A3B3C1为最佳提取工艺,但A2和A3水平相差不大。

　　以三七总氨基酸为评价指标,各因素对提取效果的影响程度依次为A＞B＞C,A、B因素对提取工艺有显著影响(P＜0.01, P＜0.05),C因素无显著影响(P＞0.05)。从K值可以看出, A1B3C1为最佳提取工艺,但A1和A2水平相差不大。

　　可见,分别以三七总皂苷和三七总氨基酸为评价指标,B、C两因素中B3C1均为最佳提取工艺,从K值可以看出,在A因素中,A2水平与最佳提取水平A3(以三七总皂苷为指标)及A1(以三七总氨基酸为指标)均相差不大,故综合考虑三七总皂苷和三七总氨基酸指标后,确定A2水平(即50%乙醇)为提取工艺,即最佳渗漉提取工艺为：以12倍量50%乙醇缓缓渗漉,渗漉速度为1～3 mL/(min·kg)。

　　3  分析与讨论

　　三七的提取方法较多,但在工业生产上多采用乙醇加热回流法[1]或渗漉法[2-3]进行提取,考虑后者具有提取完全、不需加热、不易破坏有效成分、节约能耗等优点,故本试验针对三七渗漉的提取工艺参数进行研究。

　　颗粒大小也是影响渗漉提取的因素之一,在预试验时曾拟增加药材粒度作为考察对象。但由于三七中含有较多淀粉,吸水后膨胀,即使先用溶剂浸泡膨胀后再装柱进行渗漉时,由于本身重量的作用,颗粒间的空隙受挤压变得很小,严重影响渗漉速度,不适合工业生产,故未在试验中进行考察,而均采用粗颗粒进行正交试验,能保证较好的渗漉速度。

　　从三七中分离到的主要止血活性成分三七素,化学名为β-N-乙二酸酰基-L-α,β-二氨基丙酸[4]。由于无三七素标准品,考虑到其是一种特殊的氨基酸,故采用含三七素的总氨基酸作为考察指标,其总氨基酸含量与三七素含量在一定程度上具有相关性,其测定方法采用经典的甲醛滴定法。

　　本试验结果表明,乙醇浓度对三七中有效成分的提取影响很大,随着乙醇浓度的增加,三七总皂苷提取量增加,而总氨基酸提取量下降,这与皂苷醇溶性较大,而氨基酸水溶性较大的理化性质相符。故单以三七皂苷为指标得到的最佳提取工艺条件,如以75%乙醇为溶媒[2-3,5]不利于止血成分三七素的提取。本试验通过优选采用50%乙醇作为溶媒,能够使三七总皂苷和三七素均能得到较好的提取。根据优选的最佳渗漉工艺得到的三七渗漉液,随后进一步可从中分离得到三七的有效成分总皂苷和三七素,并进行了中试考察,结果较满意,总提取转移率均在70%以上(其方法另文发表)。

【参考文献】
  　1 樊钰虎,史晓梅,陈前锋,等.三七提取工艺的筛选[J].安徽农业科学, 2007,35(6)：1792－1793.

　　2 唐红芳,毛丽珍,徐世芳.正交试验法研究三七提取工艺[J].中草药, 2001,32(1)：26－28.

　　3 闫光军,陈 建,邵明杰.渗漉法提取三七总皂苷的工艺研究[J].山东医药工业,2003,22(5)：4－5.

　　4 郑毅男,邓乔华,帅 绯,等.人参属植物止血成分比较分析[J].吉林农业大学学报,1989,11(1)：24－27.

　　5 赵惠莹,刘福强,王艳萍,等.三七有效成分提取工艺的比较研究[J].药学实践杂志,2009,27(3)：205－208.