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【摘要】 目的 建立同时测定辣椒精中2个主要成分辣椒碱及二氢辣椒碱含量的测定方法。方法 采用高效液相色谱方法,C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),甲醇-水(70∶30)为流动相,流速为1.0 mL/min,检测波长为280 nm。结果 辣椒碱及二氢辣椒碱分别在1.955~7.820 μg(r=0...
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HPLC法测定辣椒精中辣椒碱和二氢辣椒碱的含量
2011-04-30 15:45:02 来源: 作者: 【 】 浏览:722次 评论:0

【摘要】  目的 建立同时测定辣椒精中2个主要成分辣椒碱及二氢辣椒碱含量的测定方法。方法 采用高效液相色谱方法,C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),甲醇-水(70∶30)为流动相,流速为1.0 mL/min,检测波长为280 nm。结果 辣椒碱及二氢辣椒碱分别在1.955~7.820 μg(r=0.999 9)、2.709~7.224 μg(r=0.995 5)范围内呈良好线性关系,平均加样回收率分别为101.57%、108.87%。结论 该法简便,结果准确、可靠,可用于测定辣椒精中辣椒碱和二氢辣椒碱的含量。

【关键词】  辣椒精;辣椒碱;二氢辣椒碱;高效液相色谱法;含量测定

  Abstract:Objective To establish an HPLC method to determine the two principal constituent - capsaicin and dihydrocapsaicin in general alkaloids of Capsaicin. Method The analysis was performed on C18 column (4.6 mm×250 mm, 5 μm), with methanol-water (70∶30) as the mobile phase. The flow rate was 1.0 mL/min and the detection wavelength was set at 280 nm. Result The linear relationships of capsaicin and dihydrocapsaicin were within the range of 1.955~7.820 μg (r=0.999 9) and 2.709~7.224 μg (r=0.995 5), respectively. The average recoveries were 101.57% and 108.87%, respectively. Conclusion The method is convenient, the result is accurate and reliable, and can be used to determine the content of two principal constituent in general alkaloids of Capsaicin.

  Key words:general alkaloids of Capsaicin;capsaicin;dihydrocapsaicin;HPLC;content determination

  

  辣椒精为植物辣椒中经物理方法提练、精制而成,常用作镇痛、消炎、活血、冻伤、止痒、杀菌、戒毒、祛风湿、止痛、减肥。辣椒中的主要化学成分为辣椒碱和二氢辣椒碱,不同辣椒品种果实整体及不同部位中辣椒总碱的含量不同。为了建立辣椒有效成分质量控制标准,达到有效控制辣椒精质量的目的,本试验建立了高效液相色谱(HLPC)法测定辣椒精中主要成分辣椒碱及二氢辣椒碱的定量分析方法。该方法简便快速,分离度好,准确度高,可为辣椒精质量控制提供参考

  1  仪器与试药

  LC-10AT vp plus高效液相色谱仪(日本岛津),SPD-10A vp plus检测器;AB265-s电子分析天平(METTLER瑞士);超声仪。

  辣椒碱、二氢辣椒碱对照品由美国Sigma公司提供;辣椒精油溶液样品(河南倍特生物科技有限公司,批号20090416)。甲醇为色谱纯,水为双蒸水(自制)。

  2  方法与结果

  2.1  色谱条件

  色谱柱为C18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相为甲醇-水(70∶30);流速为1.0 mL/min;柱温为25 ℃;检测波长为280 nm;进样量20 μL。在此条件下辣椒碱的保留时间为12.20 min,二氢辣椒碱的保留时间为16.52 min,能与其他成分很好分开。色谱图见图1。

  注:1.辣椒碱;2.二氢辣椒碱;A.辣椒碱对照品;B.二氢辣椒碱对照品;C.供试品 图1辣椒精HPLC图谱

  2.2  对照品溶液的制备

  分别精密称取辣椒碱和二氢辣椒碱粉末适量,分别置于10 mL量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,配制成约含0.200 0 g/L的辣椒碱和二氢辣椒碱的对照品溶液,低温避光保存备用。

  2.3  供试品溶液的制备

  精密称取辣椒精油样品0.03 g,置100 mL量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,以0.45 μm微孔滤膜滤过,即得。2.4  线性关系考察

  分别精密吸取辣椒碱和二氢辣椒碱对照品溶液,分别进样10、15、20、25、30、35、40 μL,按上述色谱条件分析测定。以峰面积(A)为纵坐标,进样量(mg)为横坐标绘制工作曲线,得辣椒碱和二氢辣椒碱回归方程,分别为:Y=5.54×106X-3.7×104(r=0.999 9);Y=2.29×106X-3.3×105(r=0.995 5),线性范围分别为1.955~7.820 μg和2.709~7.224 μg。

  2.5  精密度试验

  分别吸取辣椒碱和二氢辣椒碱同一对照品溶液,重复进样6次,20 μL/次,测定其峰面积,计算其RSD分别为0.24%和0.92%,表明仪器精密度良好。

  2.6  稳定性试验

  精密吸取同一样品溶液20 μL,分别于0、4、12、24、36、48 h进样分析,分别测定峰面积,计算其RSD,结果辣椒碱峰为0.92%,二氢辣椒碱峰为2.35%,表明样品溶液在48 h内稳定性良好。

  2.7  重复性试验

  精密称取6份辣椒精油样品0.03 g,按“2.3”项下方法制得供试品溶液,分别进样20 μL,分别计算样品中辣椒碱和二氢辣椒碱含量,结果其RSD分别为0.69%和0.72%。

  2.8  加样回收率试验

  精密称取10份已测知辣椒碱和二氢辣椒碱含量的辣椒精样品0.03 g,分为2组,分别准确加入辣椒碱0.02 mg和已知浓度的二氢辣椒碱对照品溶液,依法测定,并计算加样回收率,结果见表1、表2。表1辣椒碱加样回收率试验结果 表2二氢辣椒碱加样回收率试验结果

  2.9  样品测定

  取辣椒精油样品约0.03 g,精密称定,以甲醇溶解,经0.45 μm微孔滤膜过滤后,超声脱气30 min,按上述色谱条件进行分析测定。以20 μL进样测定色谱峰面积,根据标准曲线计算样品中辣椒碱和二氢辣椒碱的质量分数。结果辣椒碱平均质量分数为51.59%,RSD=0.69%,二氢辣椒碱的平均质量分数为49.72%,RSD=0.72%。

  3  讨论

  本试验为了能在适宜的分析时间内获得指标成分的完全分离,对流动相体系进行了反复摸索,随着流动相甲醇-水的比例变化(75∶25、70∶30、65∶35、60∶40),出峰时间逐渐延长,峰高逐渐变小,峰面积也逐渐变小,分离度差。故最终确定用70∶30比例洗脱。

  试验中还对辣椒精水样、天然辣椒碱进行了含量测定。结果方法稳定可靠,重复性好,适合于辣椒总碱的质量控制

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