【摘要】  目的 研究MMP-9和微血管密度(MVD)值在子宫内膜异位症(内异症)患者的异位内膜组织中的表达，探讨其与EMs发生发展的关系。方法 用免疫组化方法检测45例患者异位子宫内膜组织和15例对照子宫内膜组织中MMP-9和微血管密度的表达。结果 (1)异位内膜细胞中MMP-9的表达明显高于在位内膜和对照内膜;(2)微血管密度值在异位内膜中的表达明显高于在位内膜和对照内膜;(3)MMP-9与微血管密度在异位内膜中的表达没有相关性(P>0.05),在对照内膜中的表达也无相关性(P>0.05)。结论 MMP-9、微血管密度在子宫内膜异位症的异位内膜表达增高，这些结果可能与异位内膜的侵袭有关。

【关键词】  子宫内膜异位症;MMP-9;微血管密度;免疫组织化学

　　Abstract Objective To study the expression of MMP-9 and microvessel density (MVD) in ectopic endometrial tissue of the patients with endometriosis (EMs) and to explore its relationship with the occurrence and progress of EMs.Methods The expression of MMP-9 and MVD in ectopic endometrial tissue of 45 cases with EMs and of 15 normal as the control was detected by immunohistochemical study.Results The expression of MMP-9 and the MVD were much higher in ectopic endometrial cells than those in the normal control; there existed no correlation between the expression of MMP-9 and that of MVD in ectopic endometriam (P>0.05) as well as in the control endometriam (P>0.05).Conclusions It may be related to the invasion of ectopic endometriam that the expression of MMP-9 and MVD increases in ectopic endometriam of the patients with EMs.

　　KEYWORDS endometriosis (EMs) MMP-9

　　microvessel density immunohistochemistry

　　子宫内膜异位症(endometriosis，EMs)是常见的妇科良性疾病，但其生物学行为却类似恶性肿瘤，具有组织侵袭和血管生成能力。目前EMs的发病机制尚不清楚，大量的研究表明，新生血管的形成为其发生、发展奠定了基础[1]。所以近年来从恶性肿瘤发生的角度探讨EMS的发病机理成为该疾病的研究热点。MMP-9是一种新近发现的与肿瘤转移有关的肿瘤转移抑制基因。微血管密度(microvascular density，MVD)则是反映血管生成的定量指标，CD34 是血管内皮细胞的特异性标记，可用于微血管密度的测定。我们采用免疫组化的方法检测EMs患者中MMP-9蛋白表达与微血管密度的关系，探讨它们在内异症发生发展中的作用，为临床诊断和防治提供实验和理论依据。

　　1 资料与方法医药论文发表

　　1.1 临床资料 45例异位内膜组织取自泸州医学院附属医院妇产科2006年10月～2007年9月因内异症而行腹腔镜或开腹手术且有完整临床资料的患者，年龄13～59岁 (35.77±9.65)，经病理证实卵巢异位15例、盆腔子宫内膜异位15例、子宫腺肌症15例。取同期因子宫肌瘤行子宫切除术患者非瘤区正常子宫内膜组织蜡块15例为对照组。所有患者术前6个月内均无任何激素及抗子宫内膜异位症药物治疗史。所有蜡块相应的HE染色组织切片由有经验的两位病理科专家再次复核确诊，符合入选条件的蜡块用于免疫组化染色。

　　1.2 试剂 鼠抗人单克隆抗体MMP9免疫组化试剂盒及DAB试剂盒均购自北京中杉生物工程有限公司;鼠抗人单克隆抗体CD34购自丹麦DOKO公司。

　　1.3 方法 采用免疫组化SP法，操作步骤按试剂盒说明进行。DAB显色同时设置阴性对照，用已知阳性片作为阳性对照。

　　1.4 结果判定 (1)阳性表达细胞判断标准:根据阳性细胞百分率及显色深浅分级，表达强度用组织学评分 (∑pi)表示：p代表同一染色强度细胞所占计数细胞百分数 (即阳性细胞百分率)：无细胞显色或阳性细胞百分数<5%为0;5%～35%细胞显色为1;36%～65%细胞显色为2;>66%细胞显色为3。i代表细胞浆显色深浅或染色强度：不显色或显色不清为0;浅黄色为1;棕黄色为2;深褐色为3。每张切片随机测定3个高倍镜视野 (200倍)的染色强度，取3个视野的组织学评分均值作为KAIl/CD82的表达强度。(2)CD34阳性表达部位为内皮细胞细胞质。阳性标准为由棕黄染色内皮细胞形成的条状、隙状等孤立或簇状结构及管腔小于8个红细胞大小的有管腔者标记为一条血管。微血管密度计数方法参照WeidnerL 方法：先在低倍镜下(100×)选择切片中间质微血管最为丰富处，然后随机观察3个高倍镜(200×)视野，每个视野计数微血管数目3次，取平均值作为微血管密度。

　　1.5 统计学分析 应用SPSS10.0 for windows软件包进行统计学分析，数据以

　　(±s)表示，各组间表达的差异用最小有意义差异法 (least significant difference，LSD法)检验。Pearson相关分析异位子宫内膜中待测指标表达是否相关。P<0.05为差异有统计学意义。

　　2 结 果

　　2.1 MMP-9主要表达于腺上皮的细胞浆，少量表达于间质胞浆，在异位内膜中呈高表达(见图1),在正常内膜中呈低表达(见图2);CD34在异位内膜中呈高表达而在对照内膜中呈低表达(见图3、4)。

　　图1 MMP-9在异位内膜的表达(S-P染色×200);图2 MMP-9在对照内膜的表达(S-P染色×200)

　　;图3 CD34在异位内膜的表达(S-P染色×200);图4 CD34在对照内膜的表达(S-P染色×200)

　　2.2 MMP-9在异位内膜组织中呈高表达，与对照子宫内膜比较有统计学意义(P<0.05);异位内膜各组间比较差异无统计学意义。异位子宫内膜组织中CD34蛋白呈高表达,与对照子宫内膜比较均有统计学意义(P<0.01);异位内膜各组间比较差异无统计学意义(P>0.05)见表1。

　　2.3 MMP-9与MVD在异位内膜和在位表达的相关性(见图5、6),由图5可知r=-0.053，P=0.729>0.05说明在异位内膜中MMP-9与微血管密度的表达无相关性。由图6可知r=0.326，P=0.235>0.05说明在在位内膜中MMP-9与MVD的表达无相关性。表1 MMP-9及微血管密度值在各组子宫内膜中的表达比较(±s)注:与对照组比较,*P<0.05,**P<0.01

　　图5 异位内膜MMP-9及MVD相关性分析散点图;图6 在位内膜MMP-9及MVD相关性分析散点图

3 讨 论

　　近年对内异症的深入研究表明，盆腔发生内异症有5个关键步骤：内膜细胞黏附到腹膜表面并侵入腹膜间皮细胞层，种植灶部位炎症细胞募集，病灶周围新血管形成，内膜细胞增殖及异位病灶形成[2] 。人子宫内膜移植的动物实验也证实了上述内异症的发展过程。此过程涉及细胞外基质和基底膜降解。

　　3.1 MMP-9在内异症中的作用 异位症形成与细胞外基质和基底膜的降解密切相关[3]。基底膜的主要构成成分有Ⅳ型胶原、层粘连蛋白、纤维连接蛋白等，而MMP-9是降解细胞外基质和基底膜的重要酶类。近年有关MMP-9的研究为它在内异症发病机制中的作用提供了依据,李艳等[4] 的研究结果与国外报道一致。本研究结果表明，异位内膜组MMP-9阳性表达率最高与在位和对照子宫内膜比较均有统计学意义，提示异位内膜及在位内膜均有较高的蛋白水解能力，由于MMP-9的蛋白水解活性有利于腹腔的侵袭，它可能通过破坏局部组织结构及基底膜成分，促使逆流入腹腔的内膜组织种植生长并使病灶不断扩大，但在位内膜与对照内膜之间比较无统计学意义,这与“在位内膜决定论”[5]的观点不相符。这可能与病理取材和实验过程中的一些因素有关。

　　3.2 微血管密度(MVD)在内异症中的作用 有学者将子宫内膜异位症与肿瘤、结缔组织病等归于“血管生成依赖性疾病”范畴。尽管EMs的发病机理有多种学说，但异位内膜在子宫外须依靠新生血管提供营养，故血管生成是子宫内膜异位灶形成的必要条件。研究表明异位病灶内部和周围生成特征性的大量新生血管，腹腔局部的血管生成活跃[6]。微血管密度是评价血管生成的定量指标，CD34为血管内皮细胞的特异性标记物它的表达有助于进行微血管密度(MVD)的定量分析，反映子宫内膜新生毛细血管的生长情况。因此，检测异位内膜微血管密度在研究EMs的血管生成作用中具有重要意义。朱慧莉等[7]研究发现，EMs患者的异位内膜和在位内膜的微血管密度明显高于对照组，且与VEGF表达呈正相关，这与其他研究报道一致[8]。本研究结果示CD34在异位内膜中的表达高于对照内膜提示异位内膜一旦脱落逆流，则具有较强的微血管增生能力，有利于异位种植生长。还发现异位内膜的腺上皮细胞周围微血管较为密集，且管腔直径小，不同于对照组内膜，提示异位内膜血管生成旺盛。而新血管大量生成，除给异位内膜组织提供营养物质并排除代谢产物外，还提供浸润转移通道，其内皮细胞还能释放大量的内皮生长因子，促使更多的血管形成。

　　3.3 MMP-9与MVD的互相作用 子宫内膜异位症是常见的妇科良性疾病，但其生物学行为却类似恶性肿瘤，具有组织侵袭和血管生成能力，MMPs的主要作用是降解基底膜和细胞外基质胶原蛋白，且能够促进肿瘤微血管的生成，为肿瘤的生长、局部侵袭、远处转移创造有利条件[9]。本研究结果显示在异位内膜中MMP-9蛋白表达增高，CD34蛋白表达增强，异位内膜中MMP-9与MVD的表达无相关性，在对照内膜中MMP-9与MVD的表达无相关性。提示在异位病灶形成过程中，是否是MMP-9的强表达削弱了对血管生成相关因子的抑制从而促使新生血管的生成使MVD值增加有待进一步的研究。

【参考文献】医药论文发表
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　　[7] 朱慧莉,黄 薇.VEGF在子宫内膜异位症发病机制中的作用[J].现代妇产科进展,2006,15 (9):678-680.

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